小鼠内源 Tfrc 基因胞外区替换为人源化的TFRC。 TFRC（转铁蛋白受体）作为一种跨膜糖蛋白，主要以二聚体形式存在于细胞表面，其经典生理功能是特异性结合含铁转铁蛋白（Tf），并通过网格蛋白依赖性内吞途径进入胞内。在内吞形成的酸化内体环境中，铁离子从转铁蛋白上解离并被转运至胞质，而脱铁转铁蛋白与TFRC的复合体则通过再循环通路返回细胞膜表面，从而维持细胞持续摄取铁离子的能力[1]。基于这一内吞-再循环的核心框架，工程化抗体或融合分子可通过与TFRC的特异性结合，被募集至内皮细胞的内吞通路中，并在内体分选过程中呈现不同的命运结局，包括向脑实质侧的跨胞转运、向血侧的回收或进入溶酶体途径降解[2-4]。由此可见，TFRC不仅为外源性分子提供了进入血管内皮细胞的“分子入口”，其介导的内体分选与再循环过程，更直接决定了载荷分子在不同转运路径中的分配比例，进而调控分子向脑侧的暴露水平及剂量依赖特征。 从分子机制层面分析，TFRC介导的外源性分子递送效率主要由两个核心因素决定。其一，脑微血管内皮细胞膜表面TFRC的可用数量、受体周转速率及再循环效率，共同构成了可动员的内吞通量，这一通量不仅限定了单位时间内可被募集的载荷分子上限，还直接影响剂量-脑侧递送量关系的斜率及饱和拐点，是决定递送效率的基础前提。其二，载荷分子在内体中的分选方向，即向脑实质侧跨胞转运、向血侧回收或进入溶酶体降解，这一过程对分子与TFRC的结合表位、亲和力及价态等结构参数高度敏感，也是导致不同工程化分子脑实质进入效率存在显著差异的关键原因。此外，体内环境中高浓度的内源转铁蛋白会与外源性分子形成持续性竞争，使TFRC的受体占用率及分子摄取过程呈现明显的剂量依赖性，进一步放大不同分子设计在体内转运行为上的差异。因此，若缺乏可在活体内稳定检测上述两类关键变量、并建立其与递送效率因果关联的模型体系，将难以系统验证分子结构参数与脑侧递送效率之间的关系，也无法实现不同研究结果的可重复对标[1][4-5]。 值得注意的是，TFRC介导的递送系统在不同物种间的转化差异，并非源于递送载荷本身的特性，而主要集中于TFRC受体系统的物种特异性及体内竞争环境的差异。人源候选分子与TFRC的结合往往具有表位选择性，而人源与小鼠TFRC（Tfrc）的氨基酸序列差异，可直接改变分子的结合可用性、亲和力区间及受体聚簇倾向，进而影响内吞通量及内体分选结局。此外，若在小鼠体内同时存在人源TFRC与小鼠内源Tfrc，可能导致受体二聚体组成异常，引入竞争性结合及内吞通路分流等干扰因素，使得体内实验结果难以单纯归因于人源TFRC介导的递送过程，降低数据解释的确定性及跨项目可比性。基于此，建立以人源TFRC受体系统为主导的体内模型，是明确血脑屏障穿梭分子（BBB shuttle）的分子工程参数与脑侧递送行为之间机制关联的必要前提，也是推动TFRC介导递送系统从基础研究向应用转化的关键支撑。