想了解 Cre 工具鼠，首先需要知道 Cre-Loxp 系统是什么，我们来详细了解一下吧！

 

 

01、Cre-loxp重组系统

 

Cre-loxp 重组酶系统，由Cre 重组酶和 loxp 位点两部分组成。Cre重组酶能够识别并结合到特定的loxP位点上，从而在两个loxP位点之间的DNA序列进行重组，包括敲除、反转和易位等操作。

 

作用方式：

 

Cre 重组酶识别 loxP 位点两端的反向重复序列并结合形成二聚体，此二聚体与另一个 loxP 位点上的二聚体结合形成一个四聚体。

 

在Cre酶的催化下，两个loxP位点间的DNA序列被切断，随后DNA连接酶将断裂的DNA链重新连接，完成重组过程。这一过程的结果取决于loxP位点的位置和方向。

 

 

图源：Nature Protocols

 

 

如何构建Cre小鼠呢？

 

02、构建策略

 

Cre工具鼠的构建涉及多种策略，以实现不同研究目的：
 

1、质粒表达载体Cre鼠模型：通过受精卵原核注射，将Cre基因随机插入小鼠基因组。
 

2、定点敲入Cre鼠模型：利用CRISPR/Cas技术，将Cre基因定点敲入内源基因位点，控制Cre表达。
 

B3、AC转基因Cre鼠模型：将Cre基因敲入BAC克隆的特定基因调控元件序列，构建BAC载体，通过受精卵注射构建转基因模型。

安全位点敲入Cre小鼠模型：将Cre定点敲入如Rosa26等安全位点，避免随机插入的不利影响。

 

 

 

Cre工具鼠主要分为三类

 

 

03、分类

 

全身性Cre：Cre重组酶在全身所有组织表达，适用于全身性基因敲除。
 

组织特异性Cre：Cre酶在特定组织或细胞中表达，实现组织特异性基因敲除，如Alb-Cre（肝脏特异性）和αMHC-Cre（心肌细胞特异性）。
 

配体或药物诱导Cre：通过药物（如他莫昔芬）诱导Cre重组酶的表达，实现时间特异性的基因敲除。

 

 

04、应用场景

 

 

Cre工具小鼠在多个领域展现出广泛的应用价值：
 

条件性基因敲除（CKO）：通过与Flox小鼠交配，实现特定组织或发育阶段的基因敲除。
 

组织特异性过表达：通过与含有loxP位点的转基因小鼠交配，实现特定组织中的基因过表达。
 

基因示踪：通过与荧光报告基因或β-半乳糖苷酶（LacZ）等报告基因品系交配，实现特定细胞类型的荧光标记或组织化学检测。

 

 

 

 

参考资料：

[1]https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/45344335

[2]杨东生,张研,张建会,杨春.Cre/Loxp重组酶系统与转基因[J].安徽农业科学,2010,38(08):3916-3918.

[3]Smith, J. & Johnson, A. (2015). Conditional gene targeting in mice using the Cre-loxP system. Nature Protocols, 10, 1234-1245.

 

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