什么是 ROSA26 位点？

 

ROSA26（全称 Gt(ROSA)26Sor）是定位于小鼠 6 号染色体上的一个内源性位点，因 1991 年 Friedrich 与 Soriano 在小鼠胚胎干细胞基因捕获（gene-trap）筛选中从克隆池中第 26 号克隆发现而得名（ROSA 意为 Reverse Orientation Splice Acceptor）。该位点不编码功能性蛋白，仅转录数种无显著开放阅读框（ORF）的非编码 RNA，因此破坏该位点不会导致明显的发育、存活或繁殖表型，是一种典型的安全港（safe harbor）位点。

Mouse Rosa26 genomic locus and its adjacent genes (Thumpd3 and Setd5) on chromosome 6.

 

为什么 ROSA26 成为基因编辑的首选位点？
 

 

对比：传统随机转基因（TG）常因插入位点、拷贝数不同导致表达差异，需建立多个 Founder 品系并反复筛选；而 ROSA26 定点敲入（KI）后代表达一致，可直接进入实验。

 

 

ROSA26 基因编辑小鼠的主要类型与应用

 

Mouse Rosa26 genomic locus and its adjacent genes (Thumpd3 and Setd5) on chromosome 6.

 

1. 报告基因小鼠（Reporter Lines）

 

将荧光蛋白（GFP、EYFP、tdTomato 等）或酶类报告基因（lacZ）插入 ROSA26 位点，配合 loxP-STOP-loxP（LSL）元件，实现 Cre 依赖的永久性标记。广泛应用于细胞谱系示踪（lineage tracing）、活体成像与细胞形态分析。

 

2. 诱导型 Cre 工具鼠（如 ROSA26-CreERT2）

 

将 CreERT2 融合蛋白插入 ROSA26，在未给与他莫昔芬（Tamoxifen）时 Cre 滞留胞质无活性；给药后 Cre 入核，实现对几乎所有细胞类型的时间可控、空间特异的基因敲除/激活，是发育生物学、功能基因组学与疾病机制研究的核心工具。

 

3. 条件性表达与疾病模型

 

通过 CAG 等强启动子驱动目的基因，结合 LSL 元件，可在特定组织或时点激活癌基因、突变等位基因（如 PIK3CA H1047R），构建可诱导的肿瘤等疾病模型。

 

4. 人源化与基因治疗研究

 

将人源 cDNA 定点插入 ROSA26，可构建遗传稳定的人源化小鼠，用于药物评价、抗体 PK 与基因治疗载体研究。

 

ROSA26 位点凭借其广谱、稳定、安全的表达特性，已成为基因编辑小鼠领域最经典、最通用的KI位点。从报告基因示踪到诱导型 Cre 工具，再到人源化与疾病模型，ROSA26 小鼠几乎渗透到现代生物医学研究的每一个角落，是功能基因组学与精准医学研究不可或缺的基础工具，欢迎各位老师前来咨询。

 

参考文献：

[1] Li S, Chen LX, Peng XH, Wang C, Qin BY, Tan D, et al. Overview of the reporter genes and reporter mouse models. Anim Models Exp Med. 2018;1(1):29-35. DOI: 10.1002/ame2.12008. PMID: 30891544; PMCID: PMC6357428.

[2] Srinivas S, Watanabe T, Lin CS, William CM, Tanabe Y, Jessell TM, et al. Cre reporter strains produced by targeted insertion of EYFP and ECFP into the ROSA26 locus. BMC Dev Biol. 2001;1:4. DOI: 10.1186/1471-213X-1-4. PMID: 11299056; PMCID: PMC6357428.

[3] Mao X, Fujiwara Y, Orkin SH. Improved reporter strain for monitoring Cre recombinase-mediated DNA excisions in mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 1999;96(9):5037-5042. DOI: 10.1073/pnas.96.9.5037. PMID: 10220414; PMCID: PMC21812.

 

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